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| 对达兰仔猪睾丸精原细胞及精原干细胞进行了体外分离、纯化和初步鉴定.对8 d达兰仔猪的睾丸实质组织,采用Ⅳ型胶原酶、透明质酸酶和胰酶组合消化法分离精细管细胞,制备单细胞悬液,用Percoll不连续密度(11%、19%、27%、35%和43%)梯度法纯化精原细胞;对纯化后的细胞培养12 h ,细胞贴壁后进行碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定,初步确定精原干细胞及其比例.结果表明所获精细管细胞悬液中活细胞和死细胞所占的比率分别为92.65%和7.35%,平均每克睾丸可获得4.17×107个细胞;精原细胞主要分布于19%～27%的Percoll 梯度带中,经纯化后其纯度为47.62%,精原干细胞占该带细胞的比例为5.52%.因此,采用组合酶消化,结合Percoll 不连续密度梯度离心法分离的达兰仔猪的精原细胞不但能够满足体外培养的需要,还可以做为精原干细胞移植的研究材料. |
| 关键词: 达兰猪 精原干细胞 分离 纯化 精原细胞 精原干细胞 分离 纯化 porcine spermatogonial stem cells identification 研究材料 干细胞移植 体外培养 密度梯度离心法 结合 酶消化 梯度带 分布 活细胞 单细胞悬液 结果 比例 染色 碱性磷酸酶 |
| DOI：10.11841/j.issn.1007-4333.2008.02.024 |
| 修订日期：2007-11-16 |
| 基金项目:北京市自然科学基金
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中国农业大学青年教师科研启动基金 |
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| Purification and preliminary identification of spermatogonial stem cells in porcine |
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